Desarrollo y validación de un método de suspensión basado en células Vero para la detección del virus Zika / Development and validation of a vero cell-based suspension method for the detection of Zika virus

Objetivo . Desarrollar y validar un método de suspensión celular utilizando células Vero 76 para el cultivo del virus Zika (ZIKV) basado en la infección de células recién sembradas no adheridas. Material y métodos . Se utilizaron tres multiplicidades de infección diferentes del ZIKV para desarrollar y comparar este novedoso método con el método estándar de monocapa de células confluentes. Además, validamos preliminarmente el método de suspensión utilizando muestras clínicas caracterizadas como positivas o negativas para el ZIKV. El método estándar de monocapa se utilizó como método de referencia, y el aislamiento viral se confirmó mediante un RT-PCR específico del ZIKV. Se estimó la sensibilidad e intervalos de confianza del 95% para el método de suspensión. Asimismo, se realizó una comparación técnica del método de suspensión contra el método de monocapa. Resultados . Nuestros hallazgos sugieren que tanto la carga viral como la replicación del ZIKV fueron comparables entre los métodos de infección en monocapa y en suspensión. Aunque ambos métodos fueron adecuados para cultivar y aislar el ZIKV, el método de suspensión se caracterizó por ser más fácil, barato y rápido, así como una técnica de aislamiento sensible. En comparación con el método de monocapa, el método de suspensión fue cuatro veces más sensible en la detección del ZIKV en casos inconclusos por RT-PCR. Conclusiones . El método de suspensión tiene el potencial de ser un método eficaz para cultivar y aislar el ZIKV y su uso es potencialmente útil tanto en la investigación como en entornos clínicos.

Objective. To develop and validate a cell suspension method using Vero 76 cells for culturing Zika virus (ZIKV) based on infection of detached freshly seeded cells. Material and methods. Three different multiplicities of infection of ZIKV were used to develop and compare this novel method to the standard confluent cell monolayer method. In addition, we preliminary validated the cell suspension method using well-characterized ZIKV positive and negative clinical samples. The standard confluent cell monolayer method was used as the reference method, and viral isolation was confirmed by a ZIKV-specific RT-PCR. The sensitivity and its 95% confidence intervals for the cell suspension method were estimated. Also, a technical comparison of the cell suspension method against the cell monolayer method was performed. Results. Our findings suggested that both the viral load and replication of ZIKV were comparable between both monolayer- and suspension-infection methods. Although both methods were suitable for culturing and isolating ZIKV, the cell suspension method was easier, cheaper, and quicker as well as a sensitive isolation technique. The cell suspension method was significantly more sensitive in detecting Zika in inconclusive cases by RT-PCR, with a fourfold increase compared to the confluent cell monolayer method. Conclusion. The cell suspension method has the potential to be an effective method for cultivating and isolating ZIKV and its application is potentially useful in both research and clinical settings.

Análisis de 23 pacientes con infección por VIH y Covid-19. Estudio descriptivo / Analysis of 23 patients with HIV infection and Covid-19. Descriptive study

Las características clínicas, el diagnóstico, el pronóstico, el tratamiento y la profilaxis de la infección por el coronavirus SARS-CoV-2 en los pacientes infectados por el VIH, son muy similares a los de la población general cuando estos se encuentran con supresión de la replicación viral con el tratamiento antirretroviral y tienen una cifra de linfocitos T CD4 + > de 200 células/uL. El tiempo medio de incubación es de 5 días (entre 2 y 14 días). En sujetos VIH positivos, cuánto mayor es la carga viral plasmática para VIH y el recuento de CD4 + es < 200 cél/uL, el tiempo que transcurre entre la infección por el coronavirus y la aparición de las manifestaciones clínicas es menor. En la población general, el 70-80% de individuos tienen una infección por SARS-CoV-2 leve/moderada, un 20-25% grave y un 5% muy grave que requiere internación en UTI. En los pacientes infectados por el VIH se desconoce esta proporción, aunque estudios preliminares consideran que las proporciones serían del 66%, 22% y 12%, respectivamente25. Se presenta una serie de 23 pacientes con coinfección SARS-CoV-2/VIH y se analizan las características epidemiológicas, clínicas y la evolución en relación con ambas infecciones

The clinical characteristics, diagnosis methods, medical prognosis, treatment alternatives and prophylaxis of coronavirus SARS-CoV-2 infection in HIV infected individuals are very similar in patients under HAART with undetectable viral load and CD4+ > than 200 cell/uL. The mean incubation time is of 5 days (range 2 to 14 days). In HIV-seropositive patients, with high viral load and CD4 < 200 cell/ uL, the time between infection for coronavirus and the onset of symptoms is minor. In the general population, 70% to 80% of individuals infected by SARS-CoV-2 develops a mild to moderate disease; 20% to 25% severe forms and 5% develops very severe clinical compromise that requieres intensive therapy unit income. In HIV-positive patients these percentages would be 66%, 22% y 12%, respectively25. Here we present a series of 23 HIV-seropositive patients coinfected by coronavirus SARS-CoV-2; we analyzed the epidemiology, clinical manifestations and the evolution related with both infections

El enigma del coronavirus - Consecuencias de la infección por el SARS-CoV-2 en el ser humano El cerebro - Gestante y recién nacido

El virus SARS-CoV-2 sigue replicándose. Sus nuevas variantes no estarían causando las muertes y hospitalizaciones graves de los años 2020 a 2022, por lo que la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha declarado el final del estado de emergencia sanitaria. Hasta el 24 de mayo de 2023, el tablero de coronavirus de la OMS señala más de 766 millones de casos confirmados, y cerca de 7 millones de muertes en el mundo, con mayor concentración en Europa, Pacífico Occidental y América (especialmente en los E.E. U.U. y Brasil). Europa y China se preparan para los nuevos avances del virus. Por ello se recomienda precaución sanitaria y cumplir con la vacunación y refuerzos, así como elaborar nuevas vacunas. Se comenta sobre la fragilidad de los ensayos aleatorios publicados en los primeros dos años de la pandemia, así como los recientes hallazgos de cuáles enfermos con COVID podrían desarrollar COVID prolongado. Es de importancia conocer los nuevos alcances sobre la afectación del coronavirus sobre la gestante, el feto y neonato y el seguimiento inicial de los últimos.

The SARS-CoV-2 virus continues to replicate. Its new variants would not be causing the deaths and serious hospitalizations of the years 2020-2022, so the World Health Organization (WHO) has declared the end of the state of health emergency. Until May 24, 2023, the WHO coronavirus dashboard shows more than 766 million confirmed cases, and about 7 million deaths in the world, with greater concentration in Europe, Western Pacific, and America (especially the U.S.A. and Brazil). Europe and China prepare for new virus breakthroughs. Therefore, health precaution is recommended, as well as compliance with vaccination and boosters, and the development of new vaccines. We comment on the fragility of randomized trials published in the first two years of the pandemic, as well as recent findings of which patients with COVID could develop long COVID. It is important to know the new scopes on the affectation of the coronavirus on the pregnant woman, the fetus and the neonate and the initial follow-up of the latter.

Expresión de los componentes del inflamasoma y su relación con los marcadores de riesgo cardiovascular en personas con infección por HIV-1 / Expression of the inflammasome components and its relationship with cardiovascular risk markers in people living with HIV-1

Introducción. La infección por el HIV-1 induce un estado de inflamación crónico en el que participan los inflamasomas. El incremento de los parámetros inflamatorios es mayor en individuos con replicación viral activa que en aquellos con control de la replicación viral. Este proceso desencadena alteraciones metabólicas relacionadas con cambios en el perfil lipídico, lo cual podría incrementar el riesgo de eventos cardiovasculares, incluso en pacientes con terapia antirretroviral. Objetivo. Establecer si existe correlación entre la expresión de los componentes de los inflamasomas y los marcadores de riesgo cardiovascular en individuos con control de la replicación viral y en aquellos con replicación viral activa con terapia antirretroviral o sin ella. Materiales y métodos. Se estudiaron 13 individuos con control de la replicación viral y 40 con replicación viral activa (19 sin terapia antirretroviral y 31 con terapia). Se evaluaron los marcadores clásicos de riesgo cardiovascular y se cuantificó mediante RT-PCR la expresión de los componentes de los inflamasomas (NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2, ASC, IL-1ß, IL-18 y caspasa-1), TLR2, TLR4, TGF-ß e IL-10. Resultados. Se observó que los pacientes con replicación viral activa y con terapia antirretroviral presentaron un incremento en la expresión de TLR2, TLR4 e IL-18, comparados con los controladores del HIV-1. Además, mostraron grandes valores de triglicéridos y lipoproteína de muy baja densidad (Very Low Density Lipopretein, VLDL), lo que se correlaciona positivamente con la expresión de los componentes de los inflamasomas NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2, ASC y caspasa-1. Conclusión. El aumento en la expresión de los componentes de los inflamasomas en los individuos con replicación viral activa y con terapia antirretroviral se correlacionó con las concentraciones de triglicéridos y VLDL, lo que sugiere el papel de la activación inmunitaria y la terapia antirretroviral en el riesgo cardiovascular.

Introduction: HIV-1 infection induces a chronic inflammatory state in which inflammasomes participate. The increase in inflammatory parameters is higher in individuals with active viral replication (progressors) than in those with viral control (HIV-1 controllers). This process triggers metabolic alterations related to changes in the lipid profile, which could increase the risk of cardiovascular events, even in patients with antiretroviral therapy. Objective: To establish whether there was a correlation between the expression of inflammasome components and cardiovascular risk markers in HIV-1 controllers and progressors with or without antiretroviral therapy. Materials and methods: We studied 13 HIV-1 controllers and 40 progressors (19 without antiretroviral therapy and 31 with therapy) and evaluated in them classic markers of cardiovascular risk. Using RT-PCR we quantified the expression of inflammasome components (NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2, ASC, IL-1ß, IL-18, and caspase-1), TLR2, TLR4, TGF-ß, and IL-10. Results: Progressors with antiretroviral therapy had an increased expression of TLR2, TLR4, and IL-18 compared to HIV-1 controllers. They also showed high levels of triglycerides and VLDL, which positively correlated with the expression of the inflammasome components NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2, ASC, and caspase-1. Conclusion: Progressors receiving antiretroviral therapy exhibited an increased expression of the inflammasome components, which correlated with the levels of triglycerides and VLDL. This supports the role of inflammation in cardiovascular risk during HIV-1 infection.

SARS-CoV-2: mucho más que un virus respiratorio / SARS-COV-2: more than a respiratory virus

RESUMEN Fundamento: el virus SARS-CoV-2 es responsable de la segunda pandemia del siglo XXI. Desde su aparición en China a finales de 2019, se asocia a neumonía y considera como un virus respiratorio más. Sin embargo, durante su diseminación global demuestra su capacidad para producir daño a otros órganos con manifestaciones clínicas nunca antes descritas para otros virus respiratorios. Objetivo: describir la evidencia científica que respalde el daño extrapulmonar directo producido por el virus SARS-CoV-2 en etapas tardías de la infección, que apoyan su naturaleza bifásica y distinta frente a otros virus respiratorios. Métodos: se realizó una búsqueda de artículos referente al tema en las bases de datos MEDLINE accedido desde PubMed, SciELO y LILACS. También se tuvieron en cuenta artículos publicados en los repositorios de preimpresión como medRxiv, BioRxiv. Mediante el gestor de búsqueda y administrador de referencias Mendeley, se eliminaron los duplicados y aquellos que no se ajustaban al objetivo del estudio, se seleccionaron 63 artículos para la revisión. Resultados: la evidencia sugiere que el SARS-CoV-2 tiene tropismo no solo limitado a las vías respiratorias. La progresión clínica de la COVID-19 presenta un curso bifásico, con manifestaciones de tipo gripal en la primera fase y episodios postagudos y persistentes en la fase tardía, ocasionados por el daño directo al sistema nervioso central, cardiovascular, endocrino y renal. Conclusiones: la infección por SARS-CoV-2 no debe considerarse solo como una infección aguda y circunscrita a las vías respiratorias.

ABSTRACT Background: the SARS-CoV-2 virus is responsible for the second pandemic of the 21st century. Since its appearance in China at the end of 2019, it has been associated with pneumonia and considered to be just another respiratory virus. However, during its global spread, it shows its ability to damage other organs with clinical manifestations never before described for other respiratory viruses. Objective: to describe the scientific evidence that supports the direct extra-pulmonary damage produced by the SARS-CoV-2 virus in late stages of infection, which supports its biphasic nature and different from other respiratory viruses. Methods: a search of the articles was carried out in the MEDLINE databases accessed from PubMed, SciELO and LILACS. Articles published in prepress repositories such as medRxiv, BioRxiv were also taken into account. Using the Mendeley reference manager and search manager, duplicates and those that did not meet the objective of the study were eliminated, selecting 63 articles for the present review. Results: the evidence suggests that SARS-CoV-2 has a tropism not only limited to the respiratory tract. The clinical progression of COVID-19 presents a biphasic course, with flu-like manifestations in the first phase and post-acute and persistent episodes in the late phase, caused by direct damage to the central nervous, cardiovascular, endocrine and renal systems. Conclusions: SARS-CoV-2 infection should not be considered only as an acute infection limited to the respiratory tract.

Potenciales agentes terapéuticos contra el COVID-19 basados en el bloqueo e inhibición del ciclo de vida viral y en el síndrome de tormenta de citoquinas / Potential therapeutic agents against COVID-19 based on blocking and inhibition of the viral life cycle and the cytokine storm syndrome

La pandemia de COVID-19, causada por SARS-CoV-2, es considerara la mayor emergencia sanitaria en un siglo. Clínicamente, la mayoría de los pacientes tienen síntomas leves a moderados. Sin embargo, pacientes de edad avanzada o con comorbilidades pueden desarrollar una de las complicaciones más severas de COVID-19, es decir, el síndrome de tormenta de citoquinas. Actualmente, no existen tratamientos aprobados para SARS-CoV-2. Mientras tanto, las estrategias terapéuticas se basan en la experiencia previa con otros virus. En este artículo se revisarán los diferentes agentes terapéuticos propuestos para el tratamiento de COVID-19 basados en el bloqueo e inhibición del ciclo de vida viral de SARS-CoV-2, y para el tratamiento del síndrome de tormenta de citoquinas. Se realizó una revisión narrativa mediante búsqueda en la base de datos PubMed. Entre los principales objetivos terapéuticos contra el SARS-CoV-2 están la proteína estructural principal Spike y las enzimas virales proteasa similar a la 3-quimotripsina, la proteasa viral similar a la papaína y la ARN-polimerasa dependiente de ARN. Remdesivir, un antiviral análogo a la adenosina que inhibe a la ARN-polimerasa dependiente de ARN, es considerado el fármaco más prometedor en el tratamiento de COVID-19. No obstante, su eficacia aún no se ha determinado. En el síndrome de tormenta de citoquinas, la lesión tisular causada por el virus puede inducir la producción exagerada de citoquinas proinflamatorias como la interleucina-6. Tocilizumab, un anticuerpo monoclonal que bloquea receptores de interleucina-6 y corticosteroides como la metilprednisolona pueden ser opciones terapéuticas en el tratamiento de la severidad del síndrome.

The COVID-19 pandemic, caused by SARS-CoV-2, is considered as the major health emergency in a century. Clinically, most patients have mild to moderate symptoms. Nevertheless, elderly or with comorbidities patients may develop one of the most severe complication of COVID-19, that is, the cytokine storm syndrome. Currently, there are no approved treatments for SARS-CoV-2. Meanwhile, therapeutic strategies are based on previous experience with other viruses. This article will review the different therapeutic agents proposed for the treatment of COVID-19 based on the blocking and inhibition of the viral life cycle of SARS-CoV-2, and for the treatment of cytokine storm syndrome. A narrative review was performed by searching in the PubMed database. Among the main therapeutic target against SARS-CoV-2 are the major structural protein Spike and viral enzymes 3-chymotrypsin-like protease, viral papain-like protease, and RNA-dependent RNA polymerase. Remdesivir, an adenosine analogue antiviral that inhibits RNA-dependent RNA polymerase, is considered the most promising drug in the treatment of COVID-19. Nonetheless, its efficacy has not yet been determined. In the cytokine storm syndrome, the tissue injury caused by the virus may induce the exaggerated production of pro-inflammatory cytokines such as interleukin-6. Tocilizumab, a monoclonal antibody that blocks interleukin-6 receptors, and corticosteroids such as methylprednisolone may be therapeutic options in treating the severity of the syndrome.

Método de reacción en cadena de la polimerasa para determinar la replicación del virus de la hepatitis B / Polymerase chain reaction method to determine replication of hepatitis B virus

Objetivo: evaluar el desempeño clínico de un método de reacción en cadena de la polimerasa con modificaciones para la detección de la replicación del virus de la hepatitis B en pacientes infectados. Métodos: se estudiaron 266 muestras de suero de pacientes provenientes de los servicios de Gastroenterología, Trasplante, Hemodiálisis y Hematología del Hospital Clínicoquirúrgico Hermanos Ameijeiras, con el antígeno de superficie (HBsAg) positivo y altos valores de enzimas hepáticas (aspartatoaminotransferasa, aspartatoaminotransglutaminasa y ganmaglutamiltrasferasa), así como 5 muestras de individuos clínicamente sanos. El ADN se extrajo mediante el método del fenol-cloroformo. Se amplificó un fragmento de la región Pre S del virus de la hepatitis B y un fragmento del gen de la ß-globina como control interno de la reacción. Resultados: El fragmento del gen de la ß-globina se verificó en las 266 muestras estudiadas. La región Pre S del virus de la hepatitis B en cambio, fue detectada en 103 de ellas, siendo informadas como positivas para la replicación viral. En la muestra se obtuvo una prevalencia 98,15 por ciento para la replicación del virus de la hepatitis B. La especificidad clínica del ensayo fue del 100 por ciento, la sensibilidad clínica del 38 por ciento, el valor predictivo positivo del 100 por ciento y el valor predictivo negativo del 64 por ciento. El análisis de concordancia no mostró acuerdo (κ= 0,022 para una p= 0,07) entre las enzimas hepáticas y la reacción en cadena de la polimerasa. Los ensayos de repetitividad y de reproducibilidad mostraron que los resultados son reproducibles. El mayor porcentaje de positividad se encontró en los pacientes remitidos por el Servicio de Hematología (66,7 por ciento). Conclusiones: el método de reacción en cadena de la polimerasa evaluado constituye una herramienta certera para el monitoreo de la replicación del virus de la hepatitis B. Contar con su implementación y aplicación en la institución que se efectuó el estudio reviste gran importancia para el sistema de salud del país(AU)

Objective: evaluate the clinical performance of a modified polymerase chain reaction method to detect replication of the hepatitis B virus in infected patients. Methods: a study was conducted of 266 serum samples from patients cared for at gastroenterology, transplantation, hemodialysis and hematology services of Hermanos Ameijeiras Clinical Surgical Hospital with positive surface antigen HBsAg and high liver enzyme values (aspartate aminotransferase, aspartate aminotransglutaminase and gamma-glutamyltransferase), and 5 samples from clinically healthy individuals. The DNA was extracted by the phenol-chloroform method. Amplification was performed of a fragment of the Pre S region of the hepatitis B virus and a fragment of the ß-globin gene as internal control of the reaction. Results: the ß-globin gene fragment was found in the 266 samples studied. The Pre S region of the hepatitis B virus, however, was detected in 103 of them. These were reported as positive for viral replication. The sample exhibited a prevalence of 98.15 percent for replication of the hepatitis B virus. Clinical specificity of the assay was 100 percent, clinical sensitivity was 38 percent, positive predictive value was 100 percent and negative predictive value was 64 percent. Concordance analysis did not reveal any agreement (κ= 0.022 for p= 0.07) between the liver enzymes and the polymerase chain reaction. Repeatability and reproducibility assays showed that the results are reproducible. The highest positivity percentage was found in patients referred from the Hematology Service (66.7 percent). Conclusions: the polymerase chain reaction method evaluated is an accurate tool to monitor replication of the hepatitis B virus. The possibility of its implementation and application at the institution where the study was conducted is very important for the Cuban health system(AU)

Factores solubles con actividad antiviral: en búsqueda de nuevos blancos terapéuticos para la infección por el VIH-1 / Soluble factors with antiviral activity: searching for new therapeutic targets to HIV-1 infection / Fatores solúveis com atividade antiviral: em busca de novos alvos terapêuticos para a infecção pelo HIV-1

Los mecanismos innatos antivirales han resultado de gran interés debido a su uso potencial para la prevención y tratamiento de la infección por el VIH. En particular, los factores solubles antivirales han sido objeto de múltiples investigaciones por su capacidad de inhibir diferentes pasos del ciclo replicativo viral y de potenciar la respuesta inmune del hospedero. Entre estos factores solubles se destacan TRIM-5α, APOBEC3G, SAMHD1, ELAFIN, SERPINA1 y SLPI, que actúan directamente sobre la partícula viral o la célula, o promueven la producción de moléculas involucradas en la respuesta inmune contra el virus. Algunos de ellos se han correlacionado con un bajo riesgo de adquirir la infección por el VIH o con una lenta progresión a sida. La exploración de los mecanismos antivirales de estas proteínas es requisito para el desarrollo de nuevas alternativas terapéuticas.

Antiviral innate mechanisms have a potential use in developing preventive and therapeutic strategies against HIV. Specifically, antiviral soluble factors have been evaluated in multiple investigations, based on their capacity to inhibit different steps of the viral cycle, and to increase the host immune response. Among these factors, TRIM-5α, APOBEC3G, SAMHD1, ELAFIN, SERPINA1 and SLPI are of particular interest, as they can act directly on the viral particle or the cell, or promote the production of molecules related to the viral immune response. Some of these factors have been associated with a low risk of HIV infection or slow progression to AIDS. Evaluation of mechanisms exhibited by antiviral proteins is a requirement for developing new therapeutic alternatives.

Os mecanismos inatos antivirais resultaram de grande interesse devido a seu uso potencial para a prevenção e tratamento da infecção pelo HIV. Em particular, os fatores solúveis antivirais foram objeto de múltiplas pesquisas por sua capacidade de inibir diferentes passos do ciclo replicativo viral e de potenciar a resposta imune do hospedeiro. Entre estes fatores solúveis se destacam TRIM-5α, APOBEC3G, SAMHD1, ELAFIN, SERPINA1 e SLPI, que atuam diretamente sobre a partícula viral ou a célula, ou promovem a produção de moléculas envolvidas na resposta imune contra o vírus. Alguns deles se correlacionaram com um baixo risco de adquirir a infecção pelo HIV ou com uma lenta progressão a aids. A exploração dos mecanismos antivirais destas proteínas é requisito para o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas.

AMPc: una molécula clave en los eventos de regulación inmune y en el control de la replicación del VIH / cAMP: A keymolecule in events of immune regulation and in the control of HIV replication

El monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) induce la activación de la proteína cinasa A, la cual regula negativamente la activación, la proliferación celular y la producción de IL-2, en células T. En células infectadas con el virus de inmunodeficiencia humana, el monofosfato de adenosina cíclico suprime la actividad de transcripción del promotor del virus y el paso del ADN viral del citoplasma al núcleo. El incremento del monofosfato de adenosina cíclico mediado por células T reguladoras CD4+, empleando la inyección de esta molécula en células blanco a través de las uniones comunicantes o empleando el eje CD39-CD73 para generar adenosina es utilizado para suprimir otras poblaciones celulares. En esta revisión se propone que la modulación del monofosfato de adenosina cíclico por las células T reguladoras CD4+ podría tener un papel dual durante la evolución de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana. Su papel benéfico se centraría principalmente en el control de la replicación viral y factores de transcripción, o evitando la infección de nuevas células blanco por disminución en la expresión de los receptores virales. Paradójicamente, la segunda posibilidad es que el aumento del monofosfato de adenosina cíclico podría tener un papel perjudicial, debido al efecto negativo sobre la proliferación, activación, respuesta citotóxica y en la producción de citocinas que se observa durante la infección viral.

Cyclic adenosine monophosphate induces the activation of protein kinase A, which negatively regulates activation, proliferation and IL-2 production in T cells. In cells infected with human immunodeficiency virus, cyclic adenosine monophosphate suppresses the transcriptional activity of long terminal repeats and the amount of viral DNA from the cytoplasm to the nucleus. The increase in cyclic adenosine monophosphate mediated by CD4+ regulatory T cells, using either the influx of this molecule in target cells through the GAP junctions or by CD39-CD73 to generate adenosine, is used by CD4+ regulatory T cells to suppress other cell populations. In this review, we suggest that modulation of cyclic adenosine monophosphate by CD4+ regulatory T cells may have a dual role during the evolution of human immunodeficiency virus infection. The beneficial role would be mainly focused on the control of viral replication and transcription factors to replicate the virus, and/or preventing the infection of new target cells, decreasing the expression of the viral co-receptors. Paradoxically to this beneficial role, the second possibility is that increased cyclic adenosine monophosphate could have a detrimental role, due to the negative effect on proliferation, activation, cytotoxic response and cytokine production, which occurs during viral infection.

Propiedades biológicas de cepas venezolanas de DENV-2 aisladas de pacientes con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue / Biological properties of Venezuelan DENV-2 isolated from patients with Dengue Fever and Dengue Hemorraghic Fever

INTRODUCCIÓN: el virus del dengue es responsable de un creciente problema de salud pública, sin que se haya dilucidado aún el papel de algunos atributos biológicos en la virulencia y(o) patogenicidad de los serotipos virales. OBJETIVO: evaluar propiedades biológicas in vitro e in vivo de 4 cepas venezolanas de DENV2 (LAR1693, LAR19094, LAR2303, INH35262) causantes de fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue y la cepa (16681) aislada de un paciente con fiebre hemorrágica del dengue /síndrome de choque del dengue. MÉTODOS: las cepas evaluadas fueron aisladas de sueros de pacientes virémicos con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue. La titulación se realizó mediante el ensayo de titulación en placas en la línea celular BHK-21, esta metodología permitió determinar el tamaño de placa y la cinética de multiplicación viral. Se determinó el tiempo y la intensidad del efecto citopático e inmunofluorescencia específica en la línea celular C6/36-HT mediante las técnicas de microscopia óptica y de fluorescencia, respectivamente. De manera adicional, se emplearon las metodologías de citometría de flujo para cuantificar la replicación viral en las células C6/36-HT y la inoculación en ratones lactantes para la determinación de neurovirulencia. RESULTADOS: las cepas, excepto 16681, produjeron placas pequeñas (m.o.i.: 0,01). La replicación viral en C6/36-HT fue mayor para 16681. El efecto citopático permitió clasificar las cepas en baja (LAR19094 y LAR2303), moderada (INH35262 y 16681) y alta citopatogenicidad (LAR1693). El primer día posinoculación se detectó inmunofluorescencia entre 5 y 50 %, excepto para 16681. La neurovirulencia en ratones lactantes inoculados con 10(4) ufp/mL causó 77,5 % (INH35262) a 100 % (LAR1693 y 16681) de mortalidad, con variabilidad en los días de supervivencia. La replicación viral (24, 36 y 48 h posinoculación) mediante citometría de flujo fue desde 3,33 % hasta 90,3 %. CONCLUSIONES: los resultados permitieron concluir que el comportamiento de las cepas virales no fue evidencia suficiente para correlacionar estos atributos biológicos in vitro e in vivo con la severidad de los cuadros clínicos.

INTRODUCTION: the dengue virus causes a growing public health problem, but it has not been possible yet to determine the role of some biological attributes in the virulence and /or pathogeneity of viral serotypes. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro and in vivo biological properties of 4 Venezuelan DENV-2 strains (LAR1693, LAR19094, LAR2303, IHN35262) responsible for dengue fever and dengue hemorrhagic fever and the reference strain (16681) isolated from a patient suffering dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome. METHODS: the evaluated strains were isolated from sera of viremic patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever. They were then subjected to the plaque titration assay in BHK-21 cell line in order to determine the plaque size and kinetics of viral replication. The length of time and intensity of cytopathic effect and specific immunofluorescence on the C6/36-HT cell line was evaluated by optical microscopy and fluorescence respectively. Additionally, the flow cytometry to quantify viral replication in C6/36-HT cells and the intracerebral inoculation in newborn mice to find out neurovirulence were both used. RESULTS: all strains, except for 16681, showed small plaques at 0.01 m.o.i. The viral replication in C6/36-HT was higher for 16681 strain. Through cytophatic effect observations the strains were classified with low (LAR19094 and LAR2303), mild (INH35262 y 16681) and high (LAR1693) cytophatogeneity. The specific immunofluoresce ranged 5 to 50 % in the first day post inoculation, except for 16681 strain. The neurovirulence in newborn mices inoculated with 10(4) pfu/mL yielded 77.5 (INH35262) to 100% (LAR1693 y 16681) mortality rate and variability during survival days. The viral replication at 24.36 and 48 hours after inoculation was assessed by flow cytometry, ranging from 3.33 to 90.3% CONCLUSIONS: the results led to the conclusion that viral strain behaviors were not sound evidence to correlate these in vitro e in vivo biological attributes with the severity of the clinical pictures.

Factores asociados con el resultado virológico de la terapia antirretroviral altamente activa (HAART) en 340 pacientes Naive, Medellín - Colombia, 1997 - 2000 / Associated factors to virologic result on highly active antiretroviral theraphy (HAART) in 340 Naive patients: Medellín - Colombia, 1997 – 2000

Contexto: La mayoría de los estudios que soportan las guías actuales de manejo de la enfermedad VIH-SIDA han sido realizados en países desarrollados. Sin embargo, su aplicabilidad y efectividad de las terapias en países en vía de desarrollo puede variar, dado que al tener diferentes características socioeconómicas pueden modificarel resultado de la terapia. Objetivo: Medir la efectividad de la terapia HAART y los factores asociados con eléxito virológico al sexto mes de tratamiento. Diseño: Cohorte histórica.Sitio: Clínica pública ambulatoria para pacientes con VIH-SIDA en un paíssubdesarrollado (Medellín-Colombia). Mayo 1997 a mayo 2000. Pacientes: 340 pacientes naive, mayores de 13 años, todos iniciaron TerapiaAntirretroviral Altamente Activa (HAART). Medición: La variable dependiente fue la carga viral al sexto mes, categorizada mayor o menor de 500 copias/ml. El análisis univariado se realizó con la medición de la razón de disparidades (OR) para las variables categóricas y la t de student para las variables cuantitativas. La regresión logística se utilizó para identificar losfactores asociados ajustando por variables de confusión...

Context: Most studies supporting guidelines on HIV/AIDS have been conducted in developed countries. Nevertheless, their applicability on effectiveness of therapies may vary in developing countries, because of different socioeconomic characteristicswhich can affect therapy responses.Objective: To measure HAART effectiveness and factors associated with favorable virologic responses after six months of treatment. Study design: Historical Cohort. Place: Public Hospital with ambulatory service for HIV/AIDS patients in a developing country (Medellín, Colombia). May 1997 trough May 2000. Patients: 340 naive patients, over 13 years of age, which began HAART theraphy. Measurements: The dependent variable was the viral load after six months of therapy, classified as a result either over or below 500 copies/ml. Univariate analysiswas conducted using odds ratios for categorical variables and student – t test for quantitative ones. Logistic regression was used in order to identify adjusted risk factors of confounding factors...